Além do fungo Aspergillus sp. que foi inoculado nas sementes, também foram encontrados os gêneros de fungos Penicillium, Cladosporium, Fusarium, Rhizopus e Epicoccum spp., além de bactérias (Tabela 1).

Os tratamentos com menor incidência do fungo Penicillium sp., foram álcool 2 minutos, NaClO 2% com ácido acético, termoterapia úmida a 60 e 70 °C, com as respectivas médias de 2, 3, 0 e 1%, que correspondem a redução na incidência de Penicillium sp. de 92; 87; 100 e 96%, se comparado ao controle, respectivamente (Tabela 1).

Os tratamentos UV-C 3 e 5 min, álcool 70% por 1 e 2 min, NaClO 2% com ácido acético, ácido peracético 1% por 3 e 6 min, e a termoterapia a seco a 60 e 70 °C foram eficiente no controle do gênero Cladosporium, com diminuição da presença do fungo em 68; 62,5; 75; 68; 75; 87,5; 75; 100 e 75%, respectivamente se comparado ao controle (Tabela 1). Corroborando com os dados obtidos no presente trabalho Marquenie et al. (2002) observou a eficiência do UV-C no controle de microrganismos em frutos de pêssegos e de podridões causadas por Botrytis cinerea em morango (MARQUENIE et al., 2002), confirmando a ação desinfetante da radiação ultravioleta do tipo C.

O ácido peracético vem tem sido utilizado na indústria alimentícia (NASCIMENTO et al., 2010). O efeito deste produto é promissor na redução de fungos e bactérias e a viabilidade dele em sementes deve ser testada em outras espécies, pois neste trabalho esta solução foi eficiente na manutenção da germinação de sementes contaminadas. Nascimento et al. (2010) destacam que o ácido peracético tem alto poder oxidante, atuando na parede celular e interior da célula microbiana prejudicando o sistema enzimático e levando a destruição do microrganismo. Se o tempo de imersão da semente na solução de ácido peracético não for elevado a ponto de ocasionar danos às células da semente, a germinação pode ser favorecida pela redução da incidência ou ausência de organismos fitopatogênicos.

Para o Fusarium spp., houve redução significativa na incidência do fungo para as sementes submetidas aos tratamentos com NaClO 2% com e sem ácido acético, álcool 70% por 2 min, ácido peracético 1% por 6 min e a termoterapia úmida 60 e 70 °C de 45; 50; 66; 66; 66 e 62,5%, respectivamente, se comparado ao controle. Rhizopus spp. apresentou baixa incidência em todos os tratamentos, não ocorrendo diferença estatística em relação ao controle com inoculação de Aspergillus sp. O fungo do gênero Epicoccum ocorreu somente nos tratamentos com UV-C 3 minutos e termoterapia a seco 70 °C, não evidenciando a presença do mesmo nos demais tratamentos (Tabela 1).

Todos os tratamentos apresentaram ocorrência de bactérias, encontrando-se as menores médias nos tratamentos com UV-C 1, 3 e 5 min, termoterapia a seco 60 e 70 °C e o controle com inoculação.

Os tratamentos que obtiveram menores médias de incidência de fungos foram os com maiores porcentagens de contaminação por bactéria provavelmente esta relação se dê por conta da antibiose e competição, ou seja, fungos e bactérias competem por espaço e nutriente e alguns deles podem produzir substâncias que inibam o crescimento de outros.

Para a porcentagem de germinação de sementes inoculadas com Aspergillus sp., observa-se que apenas o tratamento com NaClO 2% com ácido acético não diferiu do controle sem inoculação, com a maior média de germinação de 88,5%. Os demais tratamentos reduziram significativamente a germinação das sementes (Tabela 2).

É conhecido que a incidência de fungos em sementes pode afetar drasticamente a germinação e o vigor das mesmas (KOVACEC et al., 2016; MANCINI; ROMANAZZI, 2014). Rocha et al. (2014) identificaram que sementes com alta incidência de Aspergillus podem afetar diretamente a fisiologia e o vigor de sementes de soja, dado que corrobora com os resultados deste trabalho, visto que apenas a inoculação com o fungo Aspergillus sp. foi responsável pela redução de 24% da germinação das sementes de feijão em relação ao controle sem inoculação (Tabela 2).

Os tratamentos que menos causaram anormalidade nas plântulas foram termoterapia a seco 60 °C, ácido peracético 3 min, NaClO 2% com ácido acético e álcool 70% por 1 min não diferindo do controle sem inoculação. O tratamento com maior número de plântulas anormais foi o com álcool 70% por 2 min, com média de 45,50% (Tabela 2). Provavelmente o tempo de 2 min para imersão das sementes tenha sido suficiente para o etanol atravessar o tegumento e atingir as camadas mais internas da semente. O etanol é uma pequena molécula hidrossolúvel que pode afetar a fluidez das membranas biológicas alterando a interação normal entre lipídios e proteínas e interferindo na sua função de permeabilidade seletiva (MAIRENA, 1993).

A ocorrência de plântulas anormais teve relação direta com a contaminação por fungos, o que pode ser analisado, comparando o controle sem inoculação com os demais tratamentos. Esses dados reforçam o efeito prejudicial desses fungos sobre as sementes (AKONDA et al., 2016).

Os tratamentos que tiveram maior porcentagem de sementes mortas foram UV-C 3 min, ácido peracético 3 e 6 min, termoterapia seca e úmida, a 60 e 70 °C. Para as sementes submetidas ao tratamento com a termoterapia úmida a 60 °C, houve mortalidade de 100% das sementes (Tabela 2). Embora a termoterapia úmida tenha sido eficiente no controle dos fungos Aspergillus sp., Penicillium sp. e Fusarium sp., foi prejudicial a germinação e vigor das sementes.

A termoterapia úmida pode causar danos fisiológicos à semente se o tempo e a temperatura não forem adequados para a espécie, pode ocorrer o rompimento das membranas e extravasamento dos metabólitos que seriam utilizados na germinação e desenvolvimento da plântula (MACHADO, 2000).Para o teste de índice de velocidade de germinação observa-se que o tratamento que menos afetou o vigor das sementes foi com NaClO 2% por 3 min com ácido acético com 88% das sementes germinadas, o qual não diferiu dos tratamentos com NaClO 2% sem ácido acético, UV-C por 5 e 1 min, termoterapia a seco a 60 °C, ácido peracético 1% por 3 min e álcool 70% por 1 min para a variável índice de velocidade de germinação.

O hipoclorito de sódio é comumente utilizado para desinfecção de ambientes e sementes. Essa solução, ao entrar em contato com a matéria orgânica, se dissocia formando HOCl e OCl^-, sendo que a proporção entre as duas substâncias depende do pH da solução. Com o pH mais básico há maior formação de OCl^-, que tem menor potencial desinfetante. Um pH próximo de 6 é considerado ideal, pois ocorre maior concentração de HOCl e sua dissociação ocorre mais lentamente, o que explica a ação do hipoclorito com ácido acético (CAMARGO et al., 2008).

O hipoclorito de sódio tem sido comumente utilizado para desinfecção de sementes, visto sua eficácia na eliminação de patógenos e seu baixo efeito fitotóxico às sementes (ROCHA et al., 2014; CARMELLLO; CARDOSO, 2018). Corroboram com o presente trabalho a pesquisa realizada por Jesus et al. (2015) que evidenciaram que o hipoclorito de sódio na concentração de 2% de cloro ativo não prejudica as partes essenciais para o processo de germinação de sementes de Carica papaya L, onde obtiveram 80% de sementes germinadas.

A termoterapia úmida foi prejudicial à germinação e o vigor das sementes estudadas. Esse método não possui proteção residual na semente e pode afetar diretamente sua qualidade fisiológica. Também é importante analisar o binômio temperatura/tempo ideal para cada espécie (LOPES; ROSSETTO, 2004; MACHADO, 2000). Para o feijão, embora a termoterapia úmida por 30 min tenha sido eficiente para o controle de fungos fitopatogênicos, esse tratamento prejudicou o desempenho fisiológico das sementes.

Corroboram com o presente trabalho, a pesquisa realizada por Santos et al. (2016) que ao estudarem o tratamento térmico (40 °C) via úmida para controle de fitopatógenos, obtiveram sucesso na diminuição da incidência de fungos em sementes de soja, entretanto, o emprego da técnica interferiu negativamente na germinação das sementes com o tempo de exposição ao tratamento físico. Pesquisa realizada por Lazarotto et al. (2013) também evidenciaram que o tratamento térmico via calor úmido à 80 °C por 10 min, interferiu negativamente na qualidade fisiológica de sementes canafístula (Peltophorum dubium), e, que houve redução na germinação de sementes conforme aumentava o tempo de exposição ao tratamento físico.

Quanto ao comprimento da parte aérea e raiz, observa-se que não houve diferenças significativas entre os tratamentos quando comparados ao controle com inoculação de Aspergillus sp., exceção para os tratamentos com a termoterapia úmida que afetaram negativamente o comprimento da parte aérea e raiz e, o tratamento UV-C por 5 min que estimulou o desenvolvimento da parte aérea das plântulas de feijão (Tabela 3).

Os tratamentos UV-C por 1, 3, e 5 min, álcool 70% por 1 e 2 min, NaClO 2% com e sem ácido, termoterapia a seco 60 e 70 °C, ácido peracético por 3 e 6 min não prejudicaram o crescimento radicular em comparação ao controle com inoculação, com o maior comprimento 177,8 mm observado no tratamento com UV-C por 5 minutos (Tabela 3).

Na massa fresca e seca de parte aérea os tratamentos não diferiram entre si, exceção para a variável massa fresca em que o tratamento com a termoterapia úmida a 60 e 70 °C causaram mortalidade de 100 e 94% das sementes, se comparado ao controle sem inoculação (Tabela 4). Para a variável massa fresca de raiz, não houve diferença significativa entre os tratamentos. Na massa seca de raiz observou-se diferença significativa nos tratamentos com termoterapia úmida 60 e 70 °C que, causaram mortalidade de 100 e 92% das sementes, respectivamente, comparado ao controle, com inoculação (Tabela 4). Por outro lado, os tratamentos UV-C por 5 min e NaClO 2% a 3 min, aumentaram a massa seca de raiz comparado ao controle, com inoculação (Tabela 4).

Foroughbakhch-Pournavab et al. (2015) obtiveram resultados diferente do presente trabalho em demonstraram que a exposição aos raios UV-C teve efeito negativo nas variáveis plântulas normais, massa seca e fresca das plântulas de soja. Além disso, foi observado que o aumento do tempo de exposição ao UV-C elevou a porcentagem de plântulas anormais.

Resultados semelhantes foram obtidos por Rocha et al. (2014) que observaram que o uso de hipoclorito e fungicida no tratamento de sementes de soja não interferiu negativamente nas variáveis comprimento de plântulas, massa fresca e seca das plântulas e IVE, com valores mais elevados se comparado as sementes contaminadas com Aspergillus ochraceus.

Com relação às sementes de feijão inoculadas com o fungo Penicillium sp. houve incidência dos gêneros Penicillium sp, Cladosporium spp, Fusarium spp, Rhizopus spp., além de bactérias. Não houve diferença estatística entre os tratamentos de desinfecção nas sementes de feijoeiro para a incidência dos fungos Aspergillus sp., Cladosporium spp. e Rhizopus spp. quando comparado ao controle, com inoculação (Tabela 5).

Os tratamentos que apresentaram menor incidência de Penicillium sp. diferindo significativamente do controle com inoculação, foram álcool 70% por 1 e 2 min e a termoterapia úmida a 70 °C com redução de 93,0; 96,0 e 98,0%, respectivamente. Para os tratamentos com NaClO com e sem ácido acético e termoterapia úmida de 60 ºC houve inibição de 100% do fungo Penicillium sp. se comparado ao controle com inoculação (Tabela 5).

Redução na incidência de Penicillium sp. também foi observada em sementes de Cabralea canjerana (Vell.) Mart., tratadas com NaClO na concentração de 1% de cloro ativo por 2 min (AIMI et al. 2016). A assepsia de sementes com hipoclorito de sódio nas concentrações de 1 a 2% por 2 min é recomendada para sementes de espécies florestais (FERRAZ; CALVI, 2010), mas pode ser uma alternativa para a assepsia de sementes de espécies cultivadas, como o feijão. Para o fungo Fusarium spp., os tratamentos de assepsia com UV-C, 1, 3 e 5 min e a termoterapia a seco 60 e 70 °C favoreceram o aumento da presença do fungo quando comparados ao controle, os demais tratamentos não apresentaram diferenças estatísticas quando comparados ao controle, inoculação com Penicillium sp. (Tabela 5).

Todos os tratamentos de assepsia estimularam a presença de bactérias nas sementes, favorecendo o aumento na incidência de bactérias quando comparado ao controle, inoculação com Penicillium sp. (Tabela 5).

Nas sementes inoculadas com Penicillium sp., todos os tratamentos reduziram significativamente a germinação das sementes, apresentando as menores médias de germinação os tratamentos com termoterapia úmida a 70 e 60 °C, seguidos dos tratamentos com álcool 70%, 2 min e termoterapia a seco 70 °C por 5 min, com redução de 100; 98; 56 e 45% da germinação das sementes, comparado ao controle sem inoculação (Tabela 6). Corroborando com o presente trabalho outros autores mencionam o efeito prejudicial da termoterapia úmida na germinação e vigor de sementes (SANTOS et al., 2016; LAZAROTTO et al., 2013).

Na variável IVG, os tratamentos com a termoterapia a seco 70 °C (5,500), álcool 2 min (4,2499), a termoterapia úmida 60 °C (0,1416), a termoterapia úmida 70 °C (0,0000), e o controle com inoculação (3,5166) apresentaram menores médias em relação aos demais tratamentos, indicando redução no vigor das sementes de feijão inoculadas com Penicillium sp. Dias et al. (2003) analisando sementes de maracujá tratadas com álcool 70% observou redução linear na germinação e no vigor das sementes com o aumento do tempo de imersão das mesmas, o que evidencia o efeito fitotóxico do álcool quando em contato por muito tempo com as sementes.

A porcentagem de plântulas anormais nos tratamentos com inoculação de Penicillium sp. foi significativa. A maior anormalidade de plântulas ocorreu no controle com inoculação, com média de 53,5%, o que evidencia o dano direto do fungo (Tabela 6). Os tratamentos com termoterapia úmida a 60 e 70 °C tiveram alta ocorrência de plântulas mortas com médias de 96,5% e 98,5% (Tabela 6). Assim como o ocorrido às sementes inoculadas com Aspergillus sp., a termoterapia a úmido por 30 min foi prejudicial para as sementes inoculadas com Penicillium sp., podendo ter afetado as membranas e extravasado os metabólitos da semente.

Para o comprimento da parte aérea os tratamentos com maiores médias foram UV–C por 1, 3, 5 min, álcool 70% 1 e 2 min, NaClO 2%, ácido peracético por 3 e 6 min, termoterapia a seco 60 e 70 °C, que não diferiram do controle com inoculação. No comprimento de raiz a termoterapia a seco 70 °C, NaClO 2% com ácido acético, termoterapia úmida 60 e 70 °C tiveram as menores médias (Tabela 7).

Para massa fresca de parte aérea e de raiz os tratamentos não diferiram do controle com inoculação com Penicillium sp., exceção para os tratamentos com NaClO 2%, 3 min com ácido acético, termoterapia úmida 60 e 70 °C e termoterapia a seco 70 °C, que apresentaram menor massa fresca. A termoterapia a seco 70 °C só diferiu do controle para massa fresca de raiz (Tabela 8). O tratamento com maior média nas duas variáveis foi o NaClO 2%, com massa média de 1,4598 g.planta^-1 na parte aérea e 0,2694 g.planta^-1 na de raiz. Na massa seca de parte aérea os tratamentos com menores médias foram termoterapia úmida 60 e 70 °C e NaClO 2% com ácido acético. As menores médias para a massa seca de raiz foram obtidas nos tratamentos com a termoterapia úmida 60 e 70 °C e NaClO 2% com ácido acético e a termoterapia a seco 70 °C. Para os demais tratamentos, não houve diferenças significativas quanto a massa seca de raiz se comparado ao controle, com inoculação (Tabela 8). Os resultados da massa fresca e da parte aérea das plântulas provenientes de sementes inoculadas Penicillium sp. apresentaram diferenças mais expressivas das obtidas a partir das sementes inoculadas por Aspergillus sp., no entanto, se manteve a mesma tendência se destacando o efeito inibitório sobre as plântulas pelos tratamentos com termoterapia úmida.

CONCLUSÃO

O uso de álcool 70% por 1 e 2 min, NaClO 2% com e sem ácido acético e a termoterapia úmida a 60 e 70 °C por 30 min são eficientes sobre a incidência dos fungos Aspergillus sp. e Penicillium sp. em sementes de feijão, da variedade IPR Tuiuiú.

A termoterapia úmida a 60 e 70 °C por 30 min é eficiente no controle de patógenos, entretanto, causa alta mortalidade das sementes.

A inoculação dos fungos afeta diretamente a germinação e o vigor das sementes, o fungo Penicillium sp. mais agressivo que Aspergillus sp.

Os tratamentos com álcool etílico 70% por 1 min e hipoclorito de sódio a 2% com ácido acético são os mais indicados para a assepsia das sementes de feijão, visto que são os que menos prejudicaram a qualidade fisiológica das sementes e promovem redução na incidência de patógenos.

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